Cromatografía líquida HPLC: columnas y técnicas

La HPLC (High Performance Liquid Chromatography) es una técnica cromatográfica con una fase líquida móvil. Este método avanzado, que se utiliza en química analítica, separa e identifica los componentes de una mezcla. Tiene muchas aplicaciones: investigación de moléculas orgánicas en el agua como pesticidas, control de rutina en la industria farmacéutica, etc…..

Dependiendo del tipo de fase estacionaria, el método de separación es diferente:

  • cromatografía de partición: es la técnica más utilizada con una fase apolar estacionaria (columnas de tipo C18) y un disolvente polar. La fase estacionaria y la fase móvil son líquidas. La separación se realiza en función de los coeficientes de partición del soluto en las diferentes fases.
  • cromatografía de intercambio iónico: técnica utilizada para la separación de solutos ionizados o ionizables
  • Cromatografía de exclusión: también llamada «permeación en gel». La separación se realiza en función del tamaño de las moléculas orgánicas.
  • cromatografía de adsorción: la fase estacionaria de las columnas consiste en una fase polar (gel de sílice) en la que las moléculas se adsorben y se retienen más o menos en función de su afinidad. La HPLC se utiliza para la identificación, el ensayo o los controles de rutina, como la verificación de la formulación del medicamento frente a un cromatograma de control.

columna de CLAR

La columna es un elemento importante en la CLAR. Generalmente se fabrican con un tubo de acero de 5 a 10 cm que puede soportar presiones de más de 400 bar. Se deben tomar precauciones para asegurar una buena vida útil de esta pieza y permitir una validación correcta de la técnica. Esto incluye asegurarse de que se utilicen disolventes compatibles con los de la columna y de que se respete el rango de pH recomendado por el fabricante.

En el caso de las columnas apolares utilizadas en la cromatografía de particiones, la elución de los compuestos de la mezcla se realiza en función de su polaridad. Un solvente polar que elimina los compuestos polares más fácilmente.

La detección de compuestos se basa en la absorción de los rayos UV. Los detectores de arreglo de diodos cubren una amplia gama de rayos UV y, por lo tanto, son ventajosos.

La cadena HPLC también incluye una bomba que permite que el disolvente sea»empujado» a través de la columna.

Avances tecnológicos

Hoy en día, las HPLC se combinan frecuentemente con un detector de espectrometría de masas que proporciona información sobre la molécula eluida (peso molecular, estudio de fragmentos para identificar el compuesto, etc….).

Como el tiempo es precioso en el análisis químico, los equipos de cromatografía se pueden utilizar a altas presiones (600 bar), lo que reduce considerablemente el tiempo de análisis manteniendo una buena resolución.

Visite el sitio web Lachimie.fr Para obtener más información sobre las técnicas cromatográficas

Deja un comentario

Tu dirección de correo electrónico no será publicada. Los campos obligatorios están marcados con *